MC3T3-E1 Subclone 14(小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14)
细胞名称：MC3T3-E1 Subclone 14 小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14
组织来源：颅顶骨
培养条件：MEMα +10% FBS
形 态：贴壁；成纤维细胞样
背 景：从克隆的但是表型各异的MC3T3-E1细胞系中分离出一系列亚克隆。从含抗坏血酸培养基生长的成骨细胞中选择高或低成骨细胞分化、矿化的亚克隆。MC3T3亚克隆4（ATCC CRL-2593）和MC3T3亚克隆14（ATCC CRL-2594）在抗坏血酸和3到4mM无机磷酸盐中生长表现出高水平的成骨细胞分化。它们10天后形成一个矿化良好的细胞外基质（ECM）。MC3T3亚克隆24（ATCC CRL-2594）和MC3T3亚克隆30（ATCC CRL-2596）在抗坏血酸中生长表现出很差的成骨细胞分化。不形成ECM， 可以作为亚克隆4和14的阴性对照。矿化的亚克隆选择的表达作为成骨细胞标记的mRNA，及唾液酸糖蛋白（BSP），骨钙素（OCN），和甲状旁腺**/甲状旁腺**相关蛋白受体的mRNA。高或者低的分化潜能的亚克隆在培养中生产出相似数量的胶原质，表达可比较的基本水平的mRNA编码Osf2/Cbfa1，一种成骨细胞相关转录因子。植入**缺陷小鼠以后，高分化性的亚克隆形成与骨类似的形成小骨的编织骨，低分化细胞只是产生纤维组织。这些细胞系是研究体外成骨细胞分化的好模型，尤其是ECM信号。它们和原代培养颅顶成骨细胞的行为类似。
MC3T3-E1 Subclone 14(小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14)操作说明：
1)对于常温运输的细胞，收到细胞后，检查是否有运输问题，即细胞培养瓶或管是否破损，细胞培养液是否溢出。若没有运输问题，请75%酒精**后，保留封口膜，放入细胞培养箱中静置。严格检查培养箱的参数：温度，湿度和CO2浓度。细胞静置时间一般为6-12小时后，细胞状态稳定后，即可开始后续操作。选用正确的细胞培养体系，MC3T3-E1 Subclone 14(小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14)严格按照说明书的培养条件进行培养。条件允许，培养的前三天内做细胞拍照记录，通过邮件发送给我们做及时状态跟踪。
2)对于干冰运输的细胞，请取出冷冻管后，须立即放入37C水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。然后将其复苏培养，次日更换培养液。
MC3T3-E1 Subclone 14(小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14)注意事项：
1)细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以离心去掉，留10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。
2)对于生长缓慢的贴壁细胞：可采用适当的提高培养基中血清浓度，或隔日换液的方法来保证细胞的状态和生长速度。
3)对于生长不均的贴壁细胞：在培养过程中若出现细胞分布明显不均时（即某一区域细胞已重叠生长，而旁边则为一块空白），此时可将细胞进行消化，重新打散，贴壁，加入新培养基进行培养。
MC3T3-E1 Subclone 14(小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14)下面介绍几种细胞培养过程中常见的污染：
一)杆菌污染：培养基中加入***可以减少此种污染，但也不是优良的。
二)支原体污染：传说中的黑焦虫，长得暴快。24小时就满视野都是了。污染源大多数情况下是培养用血清。
三)***污染：似乎无处不在，而且顽固得很。长得暴快(12h就能在细胞上面密布)。培养液澄清。低倍显微镜下像黑色的沙子铺在细胞上，高倍镜下呈树枝状或葡萄状。
四)霉菌污染、比较常见的一种污染，常常来源于污染的空气、水和器械。
