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小鼠内皮细胞一氧化氮合酶检测试剂盒之后我又用单抗包被，结果一样：阴性、空白值好高。
1.包被：将三种单抗混合，1：1000，1:2000,1:4000......1:128000稀释，做三个平行，4°过夜。
2.**天洗涤4次，每次3min，拍干。5%脱脂乳封闭，37°，2h。
3.洗涤4次，每次3min，拍干。加抗原（为纯化好的原核表达蛋白）稀释浓度为2微克/ml，同时设阴性对照（胎牛血清1：100稀释），小鼠内皮细胞一氧化氮合酶检测试剂盒空白对照（PBS溶液)。37°，1h。
4.洗涤4次，每次3min，拍干。加酶标抗体（1:1000稀释），37°，1h。
5.洗涤4次，每次3min，拍干。加TMB显色，每孔100微升。37°，10min。
6.2M硫酸终止，
7.OD450读数。
小鼠内皮细胞一氧化氮合酶检测试剂盒结果，阳性值2.5，阴性对照和空白值很高可达到1.5。之后我又用细胞上清包被，其他和上面一样，加酶标抗体（1:1000稀释），封闭用的是1%明胶和2%的BSA，2%的BSA封闭：阴性值1.8，阳性和空白值都在2.0以上。1%明胶封闭：阴性值1.0，阳性和空白值都在2.0以上。
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