为什么我的Elisa结果如此奇怪？

为什么我的Elisa结果如此奇怪？

分析全部显一致色的可能原因就有这样之多（可能还不全）：

1 水质被金属离子等污染；防止办法尽量使用新鲜水或蒸馏水

2 洗涤不充分，样品中其它成分残留或酶残留；防止办法洗涤液应注满微孔，充分洗涤

3 移液头重复使用，未洗净或**不完全； 防止办法移液头*好一次性使用

4 酶标版太灵敏，我后期做试剂盒时曾经用过几次进口的好的板子，结果那板子真好，忒好了，吸附性超强，全给我显色，气死了。连方阵都做不出来：-（

5 还有一抗显色时间的控制等等，关于ELISA的每一步都要注意才行啊。我也是硬从粗心的人变为细心了，没办法，要不是为了实验啊。。。

从你说的情况看，你以前测IgG有良好的梯度，而现在测IgE梯度不明显，它们的差别在于测IgG是用HRP标记的二抗，而测IgE用生物素标记的二抗。我觉得在排除你的ELISA操作不熟练出现问题的情况下，你可以考虑以下因素：

1、是否是生物素标记的二抗有问题？是进口货还是国产货？检验生物素标记的二抗有无问题，可以将二抗稀释成不同浓度，然后用底物使之显色，简单的说就是给二抗做个方阵，看看它的显色及灵敏度；

2、你一抗稀释的*大倍数是多少倍？你做方阵时，可以把一抗稀释的梯度拉大一些，如果现在做到20万倍稀释，还可以继续往下，比如40万、80万、160万……因为如果一抗的浓度非常大，效价很高的话，那么肯定是需要稀释到很大的一个倍数后显色才会有明显梯度出现。

3、你的空白孔有没有包被抗原？如果包被抗原了，但结果不显色则说明你的包被封闭等操作都没问题；如果没有包被抗原直接封闭的，*后不显色，那说明二抗没有什么非特异性吸附。

4、我还想问一下，阴性对照如何？也显色吗？如果阴性对照也显色，那抗原的用量可能比较大了，再往下稀释。

此外，洗板子也要注意，尽量勿加满孔，小心串孔。没有洗板机不是问题，我做了3年ELISA，也没有洗板机，还不是都拍过来了，呵呵。