ELISA中双抗体夹心法与间接法的区别在哪

ELISA中双抗体夹心法与间接法的区别在哪

双抗体夹心法：

(1)elisa试剂盒包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗刷缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗刷，下同)。

(2) 加样：加必定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗刷。(一同做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。

(3) 加酶标抗体：于各反应孔中，elisa试剂盒参与新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗刷。

(4) 加底物液显色：于各反应孔中参与暂时制作的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。

(5) 中止反应：于各反应孔中参与2M硫酸0.05ml。

(6)elisa试剂盒效果断定：可于白色布景上，直接用肉眼调查效果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号标明。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规矩的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。间接法：用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗刷3次。加必定稀释的待检样品(不知道抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗刷。(一同做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，参与新鲜稀释的酶标**抗体(抗抗体)0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗刷,终究一遍用DDW洗刷。其他进程同“双抗体夹心法”的4、5、6。