抗体的保存

抗体的保存

抗体保存得当与否，直接决定了抗体的活性和使用效果！如果抗体保存得当，大部分抗体活性都可以维持数月甚至数年。本指南以abcam抗体保存方法为主，同样也可以应用到其他绝大部分公司的抗体产品！请谨记！无论何时请按照说明书推荐的保存条件正确保存抗体！1. 收到抗体后请务必在12000rpm离心20-30s后再打开管盖进行分装和保存！Abcam的抗体使用非常特殊的储存管，只有在12000rpm离心20-30s才能将附着在管壁或盖内的抗体全部离心下来。即使是在10000rpm离心也会导致离心不完全，导致出现抗体的量不足的现象！2. 对于abcam大部分抗体，比较合适的保存方式是分装后保存在 -20oC or -80oC 。对绝大多数抗体来说，保存在-20oC是完全足够了。没有任何证据显示保存在-80oC 会有更多的好处！ 分装可以*大程度的降低反复冻融对抗体活性的损害，同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体造成的污染可能性。 分装的量以一次实验用完为好，*少不能少于10ul每份。因为分装体积越小，抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响 复融后的分装抗体如果一次用不完，将剩余母液保存在4oC，避免再冻起来！ 抗体工作液应该当天配制当天用完，在4oC 尽量不要超过1天。 优良避免将抗体保存在自动除霜冰箱中。尽量将抗体保存在冰箱里层，而不是门上 3. 大部分抗体收到后4oC短暂保存1-2周对抗体活性是没有影响的。如果抗体很快（1-2周）会使用，推荐在4oC保存，这是为了避免反复冻融对抗体活性的损害。如果要长期保存则*好是在-20oC or -80oC。*关键的一点是要根据说明书推荐的方式来正确的保存抗体！但是，腹水形式的产品请在收到后立即冻起来！因为该类产品含有大量的蛋白酶，长期在4oC保存会导致抗体的降解！4. 大部分抗体的运输条件：一般的运输过程需要1-2周的时间，所以是在4oC的条件下来完成的。 4oC运输*主要的目的是为了避免反复冻融对抗体活性的损害（如果使用干冰运输，那么收到时抗体是冻起来的，为了分装就需要解冻。这就多了一次冻融的过程）。所以运输过程中优良避免干冰运输！特殊抗体的保存条件： 酶联抗体：永远保存在4oC，避免冻起来。否则会导致酶活性的下降或者丧失 偶联抗体：所有偶联抗体都是在棕色管中或使用锡箔纸避光保存。尤其是荧光抗体，对光极为敏感，因此在所有的实验阶段也是要避光操作的！ IgG3的同型对照：永远保存在4oC，避免冻起来。因为如果出现冻融过程，该抗体非常容易形成多聚体 无论是保存还是运输，优良避免反复冻融！ 反复冻融会导致抗体变性，导致多聚体形成，从而降低抗体的结合能力！抗体保存其它相关信息： 关于加入甘油保存： 有些人会加50%的甘油到抗体中来避免反复冻融，甘油在-20oC 会降低冰点。这对很多抗体可能是可行的。但是abcam仅对非常小的一部分抗体检测过其在这种条件下的稳定性；而abcam只对按照推荐条件保存的抗体提供质量保证！加入甘油的溶液不建议在-80oC保存，因为这已经超过了甘油的冰点。如果您要加入甘油来保存抗体的话，请谨慎注意无菌操作，避免污染！关于蛋白保护剂： 蛋白在高浓度时更不容易降解（1 mg/ml 或者更高），这就是为什么在抗体中加入BSA之类作为稳定剂的原因了；另一方面，加入的蛋白也可以减少抗体由于管壁吸附所造成的损失。但是如果抗体要用来标记的话，则不能加入蛋白稳定剂，因为这些稳定剂会和抗体一起竞争结合标记物。关于叠氮化钠（sodium azide）的使用： 为了防止微生物污染，叠氮化钠经常被加入到抗体中（终浓度0.02% (w/v)）。Abcam的很多抗体已经含有了0.02％-0.05%的叠氮化钠，在说明书的“Storage buffer”中有标明的。在下述情况中不能使用叠氮化钠：如果抗体用于染色或处理活细胞，用于体内研究： 叠氮化钠在抵抗微生物的同时，对其它大部分有机物也是有毒的，因为它阻断了线粒体的cytochrome electron transport system.要偶联带有氨基基团的抗体： 叠氮化钠会干扰任何含有氨基基团的偶联，因此在进行偶联之前，应将叠氮化钠去除。偶联后的抗体可以加入叠氮化钠保存，但是浓度只能是0.01％。对于需要偶联的抗体，thimerosal (merthiolate)可以替代叠氮化钠作为保护剂！注：叠氮化钠的去除方式： 可以通过凝胶电泳或过滤的方式去除！IgG的分子量是150kDa (IgM 是~ 600kDa); 叠氮化钠的分子量只有65Da。使用cut off 14kDa的滤膜即可将叠氮化钠从抗体中去除。

*好用相应的稀释液稀释，里面的保护蛋白和防腐剂会使保存效果好一些，另外*好不要冻融，不小心冻上问题也不大，用酶标稀释液稀释的酶或用小牛血清＋防腐剂稀释的抗血清4°保存半年没有问题。