酵母菌落直接质粒转化法

酵母菌落直接质粒转化法

1．用牙签从平板中挑取单菌落（直径2～3mm），转移到1.5ml的无菌离心管中。

2．将10μl载体DNA（100μg）与10μl转化质粒DNA混合，振荡均匀。（若转化DNA是用未经RNA酶处理的“mini－prepDNA”方法制得，则不需加载体DNA）。

3．加0.5mlPLATE溶液，振荡。

PLATE溶液：

40％聚乙二醇（PEG，分子量3350；SigmaP3640）

0.1mol/L醋酸锂

10mmol/LTris-HCl（pH7.5）

1mmol/LEDTA

4．置于实验台上，室温培养4天。

5．置42℃下热激15分钟。

6．以8000～10000r/min离心10秒沉淀细胞，小心弃去上清液，将细胞轻轻悬浮到200μl无菌蒸馏水，使细胞悬浮均匀，再直接将混合液涂选择平板。