生物样品储存方法概述之冷冻保存

生物样品储存方法概述之冷冻保存

将需要冷冻的样品冷冻（freezing,放于-20ºC或-80ºC）得当能有效的保证样品质量！下面给大家安利几种常见样品的冷冻储存方式：

DNA及缓冲液：对于基因组材料来说，收到轻微的机械剪切力不是什么大事情；对于不稳定的缓冲液，如含有DTT的缓冲液，可直接冷冻储存，无需调整。

蛋白：需要添加防冻剂用于蛋白的冷冻储存。蔗糖或甘油是防冻剂很好的选择，但对于不同的蛋白，蔗糖或甘油所占的百分比须有所不同。可选择20％的蔗糖或10％的甘油。限制性内切酶可以储存在50％甘油中以保持稳定性。由于较低的冷冻温度，这种甘油的浓度可防止溶液完全冻结！

微生物（**，酵母和**）：10-20％甘油效果很好。更高的百分比（即更接近20％）使平板划线更加容易。

高等真核细胞：常见的的冷冻过程为（仅供参考）：

1. 配制含10% DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液；
2. 取对数生长期的细胞，用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来，悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中；
3. 离心1000rpm，5min；
4. 去除胰蛋白酶及旧的培养液，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的*终密度为5×106/ml～1×107/ml；
5. 将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml；
6. 在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者；
7. 冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/ min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。
8．从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存，但*好为对数生长期细胞。在冻存前***好换一次培养液；
9．将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作，以免**；
10．冻存和复苏*好用新配制的培养液。

另外，反复冻融对样品损害很大，因此将样品分装成小规格保存是不错的选择。为了*大限度减少样品浪费，分装之前需要知道样品的浓度、后续实验每次的用量，以便分装成适当的体积。小贴士：对于分装成微小的体积，PCR条管是不错的选择。

此外，一些大分子在储存之前快速冷冻（flash-freezing）,能更好的保持功能。如何进行快速冷冻：穿上实验室外套，戴上护目镜、手套，将样品放入含有少量液氮的杜瓦瓶（dewar）中，有泡沫和烟雾产生（此操作需要在通风环境中进行）。一旦停止产生泡沫，迅速将样品取出，存储在-20ºC或-80ºC。