产品名称：抗体浓度

每一个Western blot都涉及到抗原和抗体的相互作用，因此， 抗体浓度并不是一成不变的，优化很重要。一抗和二抗浓度取决于每个抗体的特异性和抗原的特异性，以及样品中存在的抗原量。每个厂家提供的二抗特异性也不同。在改变实验参数，如更换了抗原、一抗、二抗或底物时，有必要重新优化。
也许你要问，什么情况下需要优化抗原/抗体浓度呢？若Western blot出现了以下的结果，则你有必要找找原因，优化一下抗原/抗体的浓度。
• 信号弱
• 信号迅速地减弱
• 无信号，无背景
• 高背景，白色条带
• 膜上出现橙色或棕色的点
• 非特异性条带
• 弥散条带
• 斑点状背景
抗体浓度若是利用不同浓度的抗原或抗体，开展多次Western blot，也未尝不可，但这也太耗时了。折腾两下，一个星期就过去了。为此，赛默飞世尔旗下Pierce的专家介绍了一个简便快速的斑点印迹（dot blot）方法。
简便快速的斑点印迹步骤
你要准备的材料
• 硝酸纤维素膜，剪成1 cm×8 cm的长条
• 包含抗原的样品，以PBS、TBS或类似缓冲液稀释
• 一抗和HRP结合的二抗
• 封闭液
• 洗涤液
• 底物工作液：HRP的化学发光底物（如SuperSignal底物）
• 胶片或CCD成像系统
抗体浓度操作步骤
1. 用TBS或PBS制备蛋白样品的稀释液。稀释度要取决于样品中存在的抗原浓度。由于抗原浓度通常未知，因此有必要检测宽范围的稀释度。SuperSignal底物有着皮克至飞克水平的检测灵敏度。因此样品稀释可以在微克至飞克范围。
2. 制备硝酸纤维素膜，用铅笔标上每个待测一抗/二抗的浓度。所需转印膜的数量取决于待筛查的一抗和/或二抗有多少种不同的稀释浓度。通常来说，一抗要检测一到两个稀释度，而二抗要检测两到三个稀释度。例如：使用SuperSignal底物，一抗和二抗可如下稀释：生物通
1/1000的一抗和1/50000的二抗
1/1000的一抗和1/100000的二抗生物通
1/5000的一抗和1/50000的二抗
1/5000的一抗和1/100000的二抗生物通
3. 将硝酸纤维素膜放在滤纸上。将抗原稀释液点在膜上。每个点的体积越少越好（1-5μl），以保证点尽可能地小。如果需要使用5μl以上的样品，在点完一次后，干燥2-5分钟，再点一次。让膜干燥10-15分钟，或直至无可见水分。
4. 用封闭液封闭膜上的非特异性位点，室温震荡孵育1 h。
5. 用包含1/10体积封闭液的洗涤液稀释一抗，并加到膜上，室温震荡孵育1h。
6. 用洗涤液洗膜4次，每次5分钟，用尽可能大体积的洗脱液。
7. 用包含1/10体积封闭液的洗涤液稀释二抗，并加到膜上，室温震荡孵育1h。
8. 用洗涤液洗膜4次，每次5分钟，用尽可能大体积的洗脱液。
9. 准备底物工作液，将等体积的SuperSignal Substrate Luminol/Enhancer溶液与过氧化物溶液混合。制备足够体积的工作液，以确保印迹点完全湿润，且印迹点在孵育过程中不会干。建议体积：0.125 ml/cm2印迹。
10. 抗体浓度将膜放在底物工作液中孵育5分钟。
11. 将膜取出，放在塑料布或其它防护膜上。
12. 蛋白一侧朝上，将印迹贴到胶片上，曝光30-60秒。为获得*佳结果，曝光时间可能不同。如果**次曝光不够，再试试2-5分钟。另外，也可用CCD相机或其它成像仪。

13. 在一张优化好的印迹膜上，底物产生的信号可能会持续6-24小时，这取决于具体的产品。若结果不佳，可重新曝光。随印迹时间的延长，可能需延长曝光时间。如果仍未获得*佳结果，可用不同浓度的抗原和/或抗体重复以上步骤。

猪窖蛋白(CAV1)ELISA试剂盒 porcine Caveolin 1 (CAV1) ELISA Kit 0.156-10 ng/mL 0.05 ng/mL 试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、安全性及经济性**评价。
猪角蛋白18(KRT18)ELISA试剂盒 porcine Keratin 18 (KRT18) ELISA Kit 0.156-10ng/mL 0.054ng/mL 试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、安全性及经济性**评价。
猪碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)ELISA试剂盒 porcine Fibroblast Growth Factor 2, Basic (FGF2) ELISA Kit 7.813-500pg/mL 3.2pg/mL 试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、安全性及经济性**评价。
猪间隙连接蛋白43(CX43)ELISA试剂盒 porcine Connexin 43 (CX43) ELISA Kit 0.625-40 ng/mL 0.16 ng/mL 试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、安全性及经济性**评价。
猪甲状旁腺**(PTH)ELISA试剂盒 porcine Parathyroid Hormone (PTH) ELISA Kit 12.35-1000pg/mL 5.86pg/mL 试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、抗体浓度安全性及经济性**评价。
猪甲胎蛋白(αFP)ELISA试剂盒 porcine Alpha-Fetoprotein (aFP) ELISA Kit 78.125-5000pg/mL 27pg/mL 试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、安全性及经济性**评价。
猪激活蛋白C(APC)ELISA试剂盒 porcine Activated Protein C (APC) ELISA Kit 0.156-10ng/mL 0.052ng/mL 试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、安全性及经济性**评价。
猪基质细胞衍生因子1(SDF1)ELISA试剂盒 porcine Stromal Cell Derived Factor 1 (SDF1) ELISA Kit 0.625-40ng/mL 0.245ng/mL 试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、安全性及经济性**评价。
猪基质金属蛋白酶9(MMP9)ELISA试剂盒 porcine Matrix Metalloproteinase 9 (MMP9) ELISA Kit 1.563-100ng/mL 0.56ng/mL 试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、安全性及经济性**评价。
猪基质金属蛋白酶3(MMP3)ELISA试剂盒 porcine Matrix Metalloproteinase 3 (MMP3) ELISA Kit 4.688-300ng/mL 1.8ng/mL 试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、安全性及经济性**评价。
猪基质金属蛋白酶23B(MMP23B)ELISA试剂盒 porcine Matrix Metalloproteinase 23B (MMP23B) ELISA Kit 3.125-200 ng/mL 1.2 ng/mL 试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、安全性及经济性**评价。
猪基质金属蛋白酶2(MMP2)ELISA试剂盒 porcine Matrix Metalloproteinase 2 (MMP2) ELISA Kit 78.125-5000pg/mL 33pg/mL 试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、安全性及经济性**评价。
猪基质金属蛋白酶15(MMP15)ELISA试剂盒 porcine Matrix Metalloproteinase 15 (MMP15) ELISA Kit 0.313-20 ng/mL 0.094 ng/mL 试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、安全性及经济性**评价。