产品名称：人颗粒酶A(GZMA)ELISA试剂盒

96T仅供体外研究使用，不用于临床诊断!

人颗粒酶A(GZMA)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心ELISA法定量测定人血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清液和其他生物液体中人颗粒酶A(GZMA)含量。

检测范围

0.156-10ng/mL

*低检测限

0.054ng/mL

实验原理

将人颗粒酶A(GZMA)抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的人颗粒酶A(GZMA)与连接于固相载体上的抗体结合，然后加入生物素化的人颗粒酶A(GZMA)抗体，将未结合的生物素化抗体洗净后，加入HRP标记的亲和素，再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的人颗粒酶A(GZMA)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(O.D.值)，计算样品浓度。

试剂盒内容

人颗粒酶A(GZMA)ELISA试剂盒需自备的设备及试剂

1.450±10nm滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热)

2.单道或多道微量加液器及吸头

3.稀释样品的EP管

4.蒸馏水或去离子水

5.吸水纸

6.盛放洗液的容器

试剂盒的储存及有效期

1.未开封的试剂盒：所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意，收到试剂盒后请尽快将TMB洗涤液，终止液保存于4℃，其他试剂保存于-20℃。

2.使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20℃，避免潮湿。

注意：

试剂盒内酶标条可拆卸，按实验需求可分多次使用；使用后的剩余试剂盒建议在**实验后1个月内使用完毕。产品过期时间以盒子上的标签为准，保质期内所有组分都确保是稳定的。

人颗粒酶A(GZMA)ELISA试剂盒标本的采集与保存

1.血清：

将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4^oC过夜，然后1000×g离心20分钟，取上清即可，或将上清置于-20^oC或-80^oC保存，但应避免反复冻融。

2.血浆：

用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8^oC 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20^oC或-80^oC保存，但应避免反复冻融。

3.组织匀浆：

1） 取适量组织块，于预冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中清洗去除血液，称重后备用（组织块较大需先剪碎后再匀浆）；

2） 可同时选用多种匀浆方法达到较好的破碎效果：首先将组织块移入玻璃匀浆器，加入5-10mL预冷PBS进行充分研磨，该过程需在冰上进行（有条件实验室可选用机器匀浆）；得到的匀浆液可再利用超声破碎或反复冻融 进一步处理（超声破碎过程中注意冰浴降温；反复冻融法可重复2次）。

3） 将制备好的匀浆液于5000×g离心5分钟，留取上清即可检测。

4.细胞裂解液：

1）贴壁细胞需要先用胰酶消化，离心收集细胞（悬浮细胞可直接离心收集）；

2）将收集到的细胞用冷PBS洗3次；

3）物理方法裂解细胞（可先超声破碎细胞，再反复冻融）：

i超声破碎：取适量PBS重悬细胞，用一定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧震荡破裂。

ii反复冻融：将待破碎的细胞在-20^oC以下冰冻，室温融解，反复3次，使细胞溶胀破碎。

4）将标本于2-8^oC1500×g离心